MAQUEUR RAMAN EN BIOLOGIE
Les signaux Raman sont proportionnels à la concentration et extrêmement robustes (pas de transfert d'énergie tel qu'en la fluorescence). Il est donc possible de mélanger ensemble un grand nombre de marqueurs Raman sans affecter leur signature et intensité spectrale ce qui en fait des candidats parfaits pour l'analyse simultanée à plusieurs composantes. Ils peuvent être utilisés dans des applications telles que l'identification des biomarqueurs, des études d'interactions protéiques, le profilage immunologique et le développement de vaccins.
Modification du marqueur Raman
Une modification du colorants@CNT-COOH peut aisément être obtenue par une amidation aidée d'un carbodiimide. Le groupement acide carboxylé du marqueur est activé par le carbodiimide et peut être couplé à tout amine primaire. Sur des protéines et des anticorps, les amines primaires sont présents dans les résidus de lysine et aux extrémités N-terminale de la chaîne polypeptidique et peuvent réagir avec le marqueur Raman pour former une liaison amide.
Interaction biotin-avidin
Nos marqueurs Raman sont également disponibles avec une molécule de biotine. La biotine et l'avidine forment le plus fort complexe non covalent connu entre un ligand et un recepteur. Comme on le voit ci-dessous, une avidine liera 4 biotines avec une constante de liaison (Kd) de 10-15 M. De nombreuses applications telles que l'ELISA (enzyme linked immunosorbent assay), l'immunohistochimie, les puces à protéines, le tri des cellules pour en nommer que quelques-unes, profitent de cette interaction. Des kits avec tous les réactifs nécessaires peuvent être achetés commercialement afin de modifier la biotine ou la streptavidine. Notre marqueur Raman biotinylé peut donc reconnaitre et s'attacher à un récepteur, chaîne peptidique, ou autres molécules cibles qui ont été modifiées avec une streptavidine/avidine ou un anti-anticorps. La détection d'une molécule cible peut alors se faire en spectroscopie Raman.
Nos marqueurs Raman offrent de nouvelles propriétés par rapport aux marqueurs traditionnels fluorescentes. Par exemple, tel qu'illustré ci-dessous, plusieurs molécules cibles peuvent être marquées sur la même cellule avec l'identification univoque de chaque marqueur Raman, car il n'y a pas de transfert d'énergie entre les marqueurs et ils offrent une analyse quantitative. Cette capacité de multiplexage réduit la taille des échantillons, le temps d'analyse et le volume des réactifs nécessaire. La lecture de signal très stable du marqueur Raman permet également de longues acquisitions et des éclairages répétés sur le même échantillon. Une cible pourrait être suivie pendant plusieurs jours, voire plusieurs semaines.
